为什么杜鹃花电泳不出来dna,电泳时为什么dna分子朝一个方向移动
2019-08-17 09:45:52
为什么杜鹃花电泳不出来dna问题及为什么杜鹃花电泳不出来dna最新资讯,由蓝妖花园花谱频道,于2019-08-17 09:45:47发布解答。
嘉兴市花是什么
市花市树 香樟树 香樟为常绿乔木,树冠广展,枝叶茂密,绿荫蔽日,气势雄伟,为优良的庭院、行道树种。香樟植物全身均有樟脑香气,可提取樟脑和樟油,供工业及医药等用,木材坚硬美观,是良好的家具用材。樟树广布于我国长江以南各地,嘉兴种植也比较普遍,而且还存有百年以上的大树,市区内列入大树、名木档案的樟树有90株。 石榴花 开在夏季,花常呈橙红色,亦有黄色或白色。石榴花作为一种观赏品种,深受人们的喜爱,在该市栽培也极为普遍,不少庭院、阳台和室内案头,人们都喜欢置有一、二盆石榴花作为点缀。石榴花开时,红色的花朵像烈火熊熊燃烧,能给人带来一种憧憬未来,努力向上的力量。黄和白色的花朵素淡清秀,使人赏心悦目。 杜鹃花 杜鹃花居我国三大天然名花之首,在嘉兴花卉的栽培中已经占有一定优势。目前杜鹃在嘉兴市的种植已十分普及。据初步统计,本市已有约二百栽培品种,种质资源较为丰富。杜鹃花在该市的栽培史已有四十年,近几年栽种已较为普及。杜鹃花色彩绚丽,花期从3月至6月,长达四个月之久,深受该市人民的喜爱。杜鹃作为市花,将以她独特的风格出类拔萃,象征着新嘉兴欣欣向荣,锦上添花。
DNA电泳常见问题分析
DNA电泳常见问题分析
问题 原因 解决办法
DNA带模糊 1) DNA降解 避免核酸酶污染
2) 电泳缓冲液陈旧 电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液
3) 所用电泳条件不合适 电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力
4) DNA上样量过多 减少凝胶中DNA上样量
5) DNA样含盐过高 电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐
6) 有蛋白污染 电泳前酚抽提去除蛋白
7) DNA变性 电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA
不规则DNA带迁移 1) 对于λ/Hind III片段cos位点复性 电泳前于65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟
2) 电泳条件不合适 电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液
3) DNA变性 以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热
带弱或无DNA带 1) DNA的上样量不够 增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高,上样量可适当降低
2) DNA降解 避免DNA的核酸酶污染
3) DNA走出凝胶 缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
4) 对于EB染色的DNA,所用光源不合适 应用短波长(254nm)的紫外光源
DNA带缺失 1) 小DNA带走出凝胶 缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
2) 分子大小相近的DNA带不易分辨 增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度
3) DNA 变性 电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA
4) DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析
问题 原因 解决办法
DNA带模糊 1) DNA降解 避免核酸酶污染
2) 电泳缓冲液陈旧 电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液
3) 所用电泳条件不合适 电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力
4) DNA上样量过多 减少凝胶中DNA上样量
5) DNA样含盐过高 电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐
6) 有蛋白污染 电泳前酚抽提去除蛋白
7) DNA变性 电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA
不规则DNA带迁移 1) 对于λ/Hind III片段cos位点复性 电泳前于65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟
2) 电泳条件不合适 电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液
3) DNA变性 以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热
带弱或无DNA带 1) DNA的上样量不够 增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高,上样量可适当降低
2) DNA降解 避免DNA的核酸酶污染
3) DNA走出凝胶 缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
4) 对于EB染色的DNA,所用光源不合适 应用短波长(254nm)的紫外光源
DNA带缺失 1) 小DNA带走出凝胶 缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
2) 分子大小相近的DNA带不易分辨 增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度
3) DNA 变性 电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA
4) DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析
植物总DNA提取为什么提不出来?
我也遇到这种情况,急死我了,我提的是酵母的DNA,其DNA在加RNA酶之前用分光法测得有,加入RNA酶之后就不见了,蛋白不见是正常的吧,因为接着要用氯仿苯酚除酶(蛋白)嘛,做了几次都是这样,应该不是操作问题。。
电泳时为什么dna分子朝一个方向移动
DNA分子特性和电泳条件。
⑴DNA分子大小 DNA分子越大在胶中的摩擦阻力就越大,泳动也越慢,迁移速率与线状DNA分子质量的对数值成反比。
⑵DNA分子构型 对于质粒DNA分子即使具有相同分子质量,因构型不同也会造成电泳时受到的阻力不同,最终造成泳动速率的不同。常规电泳中质粒DNA分子的3种构型泳动速率:超螺旋最快、线状分子次之,开环分子最慢。
⑶不同的胶浓度 对于同种DNA分子胶浓度越高,电泳速率越慢。不同胶浓度对于DNA片段呈线性关系有所区别,浓度较稀的胶线性范围较宽,而浓的胶对小分子DNA片段呈现较好的线性关系。所以常规实验中对于小片段DNA分子的分离采用高浓度的胶分离(有时甚至用2%的凝胶),而对于分离大片段则用低浓度的凝胶。
⑷电场强度
⑸溴化乙锭 简称EB,电泳中的染色剂,具有扁平结构,能嵌入到DNA碱基对间,对线状分子与开环分子影响较小而对超螺旋态的分子影响较大。当DNA分子中嵌入的EB分子逐渐增多时,原来为负超螺旋状态的分子开始向共价闭合环状转变,电泳迁移速度由快变慢;当嵌入的EB分子进一步增加时,DNA分子由共价闭合环状向正超螺旋状态转变,这时电泳迁移速率又由慢变快。这个临界点的游离EB质量浓度为0.1g/ml~0.5g/ml,即电泳时所加的浓度。因此一般电泳可以忽略此因素,而对于特殊电泳,消除此因素影响可采用电泳后染色。
⑹电泳缓冲液
⑴DNA分子大小 DNA分子越大在胶中的摩擦阻力就越大,泳动也越慢,迁移速率与线状DNA分子质量的对数值成反比。
⑵DNA分子构型 对于质粒DNA分子即使具有相同分子质量,因构型不同也会造成电泳时受到的阻力不同,最终造成泳动速率的不同。常规电泳中质粒DNA分子的3种构型泳动速率:超螺旋最快、线状分子次之,开环分子最慢。
⑶不同的胶浓度 对于同种DNA分子胶浓度越高,电泳速率越慢。不同胶浓度对于DNA片段呈线性关系有所区别,浓度较稀的胶线性范围较宽,而浓的胶对小分子DNA片段呈现较好的线性关系。所以常规实验中对于小片段DNA分子的分离采用高浓度的胶分离(有时甚至用2%的凝胶),而对于分离大片段则用低浓度的凝胶。
⑷电场强度
⑸溴化乙锭 简称EB,电泳中的染色剂,具有扁平结构,能嵌入到DNA碱基对间,对线状分子与开环分子影响较小而对超螺旋态的分子影响较大。当DNA分子中嵌入的EB分子逐渐增多时,原来为负超螺旋状态的分子开始向共价闭合环状转变,电泳迁移速度由快变慢;当嵌入的EB分子进一步增加时,DNA分子由共价闭合环状向正超螺旋状态转变,这时电泳迁移速率又由慢变快。这个临界点的游离EB质量浓度为0.1g/ml~0.5g/ml,即电泳时所加的浓度。因此一般电泳可以忽略此因素,而对于特殊电泳,消除此因素影响可采用电泳后染色。
⑹电泳缓冲液
DNA电泳和浓度测量都很好,为什么PCR扩不出来 ?用相同的体系和程序以前提取的DNA能扩出来,为什么?
那我建议你用以前的DNA作为阳性对照同时做一管,这样才能知道除DNA模板以外,其他试剂没有问题。这时候才要考虑是DNA模板的问题。
因为PCR反应的条件不仅受到DNA模板的影响,还有其他因素,如:
引物:有没有正确保存,是否降解。
酶:是否失效。
反应体系:体系应该没问题,既然你上次用同样的体系能做出来。
因为PCR反应的条件不仅受到DNA模板的影响,还有其他因素,如:
引物:有没有正确保存,是否降解。
酶:是否失效。
反应体系:体系应该没问题,既然你上次用同样的体系能做出来。
杜鹃是哪些城市的市花?请尽量详细列举,谢谢
丹东、 大理、 三明、 珠海、 韶山、 长沙、 九江、 巢湖、 井冈山、 嘉兴、 余姚、无锡、台北、基隆市市花
电泳无DNA条带,什么原因?
异戊醇沉淀出很多絮状沉淀(应该是蛋白质多了,最好离心后用70%乙醇洗两次,有条件的话加点蛋白酶K)
在最前沿有大团的亮点(是不是象飞机场跑道那样拖尾得厉害?RNA太多了。有条件的话加RNA酶,没条件的话多洗几次)
根据我的经验,如果其他步骤没问题,很有可能是最后一步加TE时没有溶好,你在混匀器上转一下。还有,最后取样时候注意去中间的,不要取底部(蛋白质多)和上部(DNA浓度低)
抽DNA看似简单,对新手来说还是需要花时间熟悉。多找人问问,最好有前辈带你做一遍,很快的。
补充:抽DNA,并不是沉淀越多效果越好。DNA/RNA肉眼是无法看见的,你看到的沉淀,都是蛋白质。很有可能你的DNA已提出来了,但在染EB时由于量太少被蛋白质和RNA覆盖掉了。
建议你1重跑一次电泳看效果怎么样(有可能是DNA没溶好);2吸取教训重提一次。
在最前沿有大团的亮点(是不是象飞机场跑道那样拖尾得厉害?RNA太多了。有条件的话加RNA酶,没条件的话多洗几次)
根据我的经验,如果其他步骤没问题,很有可能是最后一步加TE时没有溶好,你在混匀器上转一下。还有,最后取样时候注意去中间的,不要取底部(蛋白质多)和上部(DNA浓度低)
抽DNA看似简单,对新手来说还是需要花时间熟悉。多找人问问,最好有前辈带你做一遍,很快的。
补充:抽DNA,并不是沉淀越多效果越好。DNA/RNA肉眼是无法看见的,你看到的沉淀,都是蛋白质。很有可能你的DNA已提出来了,但在染EB时由于量太少被蛋白质和RNA覆盖掉了。
建议你1重跑一次电泳看效果怎么样(有可能是DNA没溶好);2吸取教训重提一次。